โรงเรียนอนุบาลพระนครศรีอยุธยา ได้เริ่มเปิดทำการสอน เมื่อวันที่ 17 พฤษภาคม พ.ศ. 2487 ณ บ้านหมื่นคล่องคำณวนการ ตำบล  หอรัตนไชย อำเภอกรุงเก่า จังหวัดพระนครศรีอยุธยา โดยมีนางสาวบรรจบพันธ์ สังขดุล  และนางสาวบุษบง คล่องคำณวนการ  เป็นผู้  ดำเนินการ แต่อยู่ในความดูแลของ นางสาวอุบล ประภาวสิทธิ์  ครูใหญ่  โรงเรียนจอมสุรางค์อุปถัมภ์ ในปี พ.ศ. 2490 ได้มาเปิดทำการ  สอนในบริเวณโรงเรียนสตรีจอมสุรางค์อุปถัมภ์  โดยซ่อมเรือนอาหารเก่าของโรงเรียนขึ้นเป็นสถานที่เปิดรับนักเรียนตั้งแต่ชั้นอนุบาลปีที่ 1  และชั้นอนุบาลปีที่ 2  
     ต่อมากรมสามัญศึกษาได้อนุมัติเงินงบประมาณค่าก่อสร้างมาให้เป็นจำนวนเงิน 229,200 บาท ซึ่งเมื่อ ประมูลราคาแล้ว ยังขาดเงินอยู่
 อีก 5,400 บาท ท่านศึกษาธิการจังหวัด ขุนศึกษากรรม์พิเศษ ได้ขอความร่วมมือไปยัง นายแพทย์ทรวง เดชกำแพง ตลอดจนสมาชิก  จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัยได้ช่วยเหลือสมทบทุน 5,000 บาท จึงจัดสร้างตามแบบแปลนของกรมสามัญศึกษา ตัวโรงเรียนเป็นอาคารไม้  ชั้นเดียว กว้าง 11 เมตร ยาว 52 เมตร ตั้งอยู่ที่ตำบลท่าวาสุกรี อำเภอกรุงเก่า จังหวัดพระนครศรีอยุธยา โดยได้ทำการย้ายจาก โรงเรียน จอมสุรางค์อุปถัมภ์ เมื่อวันที่ 5 มกราคม พ.ศ. 2497 โดยมี นางสาวบุญช่วย ขันธมุติ เป็นผู้รักษาการในตำแหน่งครูใหญ่ นางสาวมารยาต บำบัดนรภัย นางสาวสนุ่น คงพันธ์ เป็นผู้ ดำเนินการสอน และเริ่มทำการเปิดป้ายนามโรงเรียน เมื่อวันที่ 11 มกราคม พ.ศ. 2497 โดยมีท่านปลัดกระทรวงศึกษาธิการ ( หม่อมหลวงปิ่น มาลากุล ) ได้กรุณามาเป็นประธาน
ในพิธี ในขณะนั้นมีนักเรียนทั้งสิ้น 43 คน